生物樣本是醫學研究的重要資源,其質量在很大程度上決定著臨床結果的準確性和可靠性。目前生物樣本及其提取產物主要有深低溫和常溫兩大類保存方式,針對不同科研的需求,更多的樣本保存方式也相繼問世,本文將對常用的樣本保存方式及運輸條件進行小結,可以收藏保存備用。
樣本儲存條件
1. -196℃、-150℃ 深低溫凍存
超低溫凍存是理想的樣本保存方法,目前液氮(-196℃)是靠譜的樣本保存方法,然而由于樣本浸沒在液氮中,游離的組織碎片可能帶來交叉污染的潛在風險,因此催生了氣相液氮(-150℃)的保存方式,就是將樣本置于液氮以上、氣相液氮的包圍之中,可以很好地避免交叉污染的風險。另外,也可以通過電力冰箱制冷達到-150℃的低溫效果,從而能滿足樣本的長期保存需求。因為-137℃是水玻璃化溫度,低于此溫度時細胞內能導致內容物降解的一切生化反應均處于失活狀態,從而能達到長期保存的要求。
2. -80℃
-80度低溫保存是凍存核酸較為理想的樣本保存方法:在不具有液氮保存條件的生物樣本庫,也可以考慮使用-80℃深低溫冰箱來保存組織樣本。有研究表明,在-80℃條件下,DNA產量、完整性以及RNA產量可以維持長達7年不發生明顯改變,但是RNA完整性在凍存5年后開始下降。因此建議保存組織時候進行分裝,再加入RNA特異性穩定劑后凍存于-80℃,更有利于組織內RNA的保存。
關于蛋白質的保存,目前也以深低溫凍存為主,可以很好地保護其穩定性。短期儲存也可以保存在-20°C的低溫冰箱中。
3. 常溫保存:鑒于深低溫凍存的運輸與操作的不便性,常溫保存的方法應運而生。常溫保存技術的原理可類比線蟲的脫水休眠現象,利用某些特殊技術或容器將脫水干燥后的樣本置于密閉環境中,或者向生物樣本中添加保護劑,使相關酶失活,從而達到常溫環境下保護樣本的目的。
樣本的運輸條件01 全血/血漿/血清/干血片DNA: 24h內可室溫運送至實驗室,72h內運輸至實驗室置于2-8℃條件,72h及更長時間的運輸需要在-20℃條件下。RNA:4h內分離血漿,5天內能夠運輸至實驗室可保存在2-8℃,5天及更長時間運輸時需在-20℃條件下。干血片可在室溫下運輸。02 肺泡灌洗液24h內可室溫運輸至實驗室,72h內需在2-8℃冷藏運輸,72h及更長時間運輸需采用-70℃或為更嚴格的條件。03骨髓骨髓標本應在2-8℃條件下運輸,如果用于RNA分析,應該添加RNA穩定劑。04 口頰細胞室溫條件下,核酸可穩定存在1周,可室溫運輸,檢測RNA,需放置在RNA穩定劑中。05 淋巴細胞層從血液里分離的淋巴細胞,需在2-8℃冷藏運輸,無法及時提取時應放置-70℃以下儲存。06 腦脊液DNA病毒檢測: 需在2-8攝氏度條件下運輸,應該保存在-20℃或-70℃或者更低溫度條件下。RNA分析:立即置于冰上降溫,并置于干冰上運輸至實驗室。07 細針抽取物 DNA病毒檢測: 需在2-8℃條件下運輸,應該保存在-20℃或-70℃或者更低溫度條件下。RNA分析:立即置于冰上降溫或置于RNA穩定劑中進行運輸。08 組織DNA分析:新鮮組織應該立即置于-20℃,并保持在冰上運輸保存。RNA分析:新鮮組織采集后立即采用液氮速凍,進行運輸保存。石蠟包埋組織可室溫運輸保存。09 痰液 30min內可在室溫下運輸至實驗室,否則應在4-8℃條件下運送010 糞便可借助糞便收集盒及糞便采集管進行采集,黃豆粒大小樣本即可。4h內進行核酸提取或-80℃低溫保存。011 宮頸和尿道拭子在檢測試劑廠家推薦的運送培養基中運輸。012 植物組織樣本采集體態正常的新鮮樣本放入樣本袋中做好標記;樣本若有泥土一般需要洗滌,之后對其進行干燥并盡快進行核酸提取;常溫或者-20℃進行運輸保存。 這里需要注意的是樣本儲存在穩定的條件下,應避免反復凍融。
蘇州阿爾法生物實驗器材有限公司提供的實驗室冰箱、超低溫冰箱,低溫存儲箱、液氮罐、-80冰箱廣泛應用于生物樣本保存、生物試劑保存等。